La heterogeneidad celular está presente en toda muestra biológica ya sea a nivel de diferencias en la expresión de genes o en los niveles de proteína. En la actualidad la mayoría de experimentos para determinar la expresión de genes se basa en el promedio de toda una población. Estos datos son muy informativos pero asumen que el promedio refleja el mecanismo biológico que opera en toda una población celular. Esto puede enmascarar la presencia de subpoblaciones minoritarias que se comportan de manera diferente así como una distribución bimodal en los niveles de expresión.
Con la citometría de flujo podemos analizar millones de células únicas detectando proteínas de membrana e intracelulares simultáneamente permitiendo caracterizar poblaciones heterogenias. Este tipo de análisis está limitado a la existencia de anticuerpos que reconozcan la proteína de interés.
Con el nuevo ensayo PrimeFlow RNA se puede analizar RNA y proteína simultáneamente con un citómetro de flujo convencional. Con este ensayo se puede detectar un máximo de tres RNAs por célula combinando esta detección con el marcaje con anticuerpos de superficie o intracelulares.
Las aplicaciones de esta técnica son:
- Correlacionar niveles de RNA y proteína a nivel de célula única
- Detectar non-coding RNAs
- Detectar RNA viral en células infectadas
- Detectar el RNA cuando no tenemos un anticuerpo que reconozca la proteína de interés
- Tener información de la heterogeneidad en la expresión de genes dentro de una población celular
Quiero más información sobre el PrimeFlow RNA
Referencias:
https://media.affymetrix.com/support/ebioscience/brochures/Single_Cell_Brochure_080515-WEB.pdf
https://media.affymetrix.com/support/ebioscience/brochures/Single_Cell_Brochure_080515-WEB.pdf
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