La Apoptosis es un proceso bioquímico altamente regulado. Esta vía desempeña un papel clave en el desarrollo celular, como en la hematopoyesis, y difiere de la necrosis en que la apoptosis se trata de una muerte celular controlada.
La muerte celular en los diferentes subtipos de células afecta a:
- La definición y estructura de la célula
- Cambio estructurales
- Alteraciones de membrana
- Cambios en los procesos celulares
- Degradación del núcleo
La apoptosis puede ser vista como un proceso estado-dependiente de su inducción que se divide en apoptosis temprana, intermedia y tardía. Para distinguir en qué estado se encuentra y diferenciarlo así de los procesos necróticos, se han desarrollado productos y métodos específicos.
Identificación de la Apoptosis Temprana
La etapa de apoptosis temprana está representada por cambios y pérdida final del potencial de membrana mitocondrial. El potencial de membrana mitocondrial es detectado por JC-1, un marcador que entra selectivamente en las mitocondrias. En mitocondrias funcionales, JC-1 forma agregados que muestran una emisión fluorescente a ~ 590 nm. Con la reducción del potencial de la membrana el colorante forma monómeros, donde la emisión se desplaza a ~ 530 nm. Este cambio se utiliza para medir el potencial de membrana mitocondrial, y la entrada de la célula en apoptosis temprana.
Identificación de la Apoptosis Intermedia
Otro proceso clave en la apoptosis es la translocación de fosfatidylserina (PS), una proteína localizada en la membrana celular. PS en la célula funcional es citosolica pero se transloca a la porción extracelular de la membrana durante la etapa intermedia de la apoptosis. La Anexina V se puede usar para detectar PS donde los marcadores impermeables como el Propidium Iodide o el 7-AAD tienen que utilizarse como contratinción para diferenciar la apoptosis temprana de la apoptosis tardía o necrosis.
Identificación de la Apoptosis Tardía
Se puede identificar la etapa tardía de la apoptosis a través de la fragmentación del DNA. Apo-Direct assay utiliza un método para detector la multitud de terminación 3’-OH creadas durante esta etapa final de la apoptosis. Se mide a través de 2 tintes que utilizan FITC-dUTP para detectar los fragmentos de DNA y el Ioduro de Propidio como contratinción para el DNA total.
Y estas son solo unas pocas maneras de identificar la apoptosis…
Formas adicionales de detectar la apoptosis/necrosis serian observar los cambios que se dan a nivel metabólico, de membrana, caspasas, fosfoproteínas, niveles de calcio en la célula, y otros.
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