Discriminar entre células viables (vivas) y no viables (muertas) es importante en los ensayos de Citometría de flujo. Las células muertas de tu muestra pueden unirse de forma no especifica a los anticuerpos dando lugar a falsos positivos y en última instancia, volviendo tus resultados poco precisos.
La discriminación entre células vivas y muertas en ensayos de Citometría de flujo puede llevarse a cabo utilizando 7-AAD Viability Dye o Propidium Iodide (PI) Staining Solution. El 7-AAD o PI marcan las células no viables uniéndose al núcleo de las células muertas, ya que el acido nucleico de las células viables no queda accesible y no se tiñe. Cuando se analizan por citometría de flujo los resultados se descartan las células teñidas con este marcador de viabilidad.
Cuando marcamos proteínas intracelulares, para discriminar las células viables de las no viables, utilizaremos Fixable Viability Dye eFluor 450, Fixable Viability Dye eFluor 660, or Fixable Viability Dye eFluor 780. Estos marcadores de eFluor son permanentes y no se eliminan con los lavados previos a la preparación de las células para su análisis. Para más información sobre los marcadores de viabilidad podéis consultar el siguiente enlace: Functional Dyes & Reagents
Resultados con Fixable Viability Dye eFluor 660
Timocitos BALB/c sin cultivar (izquierda) y cultivados overnight a 37°C (derecha) y posteriormente teñidos con 1 uL de Fixable Viability Dye eFluor 660 por mL de timocitos resuspendidos a 5x10e6 cells/mL en PBS. Para el análisis se utilizaron células totales.
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