El avance en la medicina genómica ha provocado que los test genéticos para el diagnóstico y la predicción en el área sanitaria cobren cada vez una mayor importancia. Disponer de nuevas herramientas para el diagnóstico de esta enfermedad resulta esencial.
- ¿Qué es la Fibrosis quística?
- ¿Qué genes están relacionados con la enfermedad?
- Diagnóstico de la Fibrosis quística mediante Agena Bioscience
- MassARRAY: Una plataforma versátil
- ¡Descubre toda la variedad de ensayos incluidos en Assays by Agena!
¿Qué es la Fibrosis quística?
La Fibrosis Quística es una enfermedad genética hereditaria que produce una alteración en la secreción de mucosidades, afectando a muchos sistemas del cuerpo, especialmente al sistema respiratorio y al digestivo.
El moco es una sustancia que lubrica y protege la superficie del tracto respiratorio, el sistema digestivo, el sistema reproductor y muchos otros órganos y tejidos. La fibrosis quística produce un espesamiento y aumento de la viscosidad del moco que se acumula y como consecuencia se dificulta la respiración, y se producen infecciones e irritaciones pulmonares. También puede impedir el paso al intestino de las enzimas digestivas producidas en el páncreas que son necesarias para una correcta digestión de los alimentos, produciendo diarrea, malnutrición y pérdida de peso.
La fibrosis quística suele manifestarse en la infancia, aunque en algunos casos (4%) se manifiesta en la edad adulta. Gracias al desarrollo de tratamientos paliativos, la esperanza de vida es ahora mucho mayor. Actualmente se está investigando en terapia génica como un posible tratamiento para la fibrosis quística.
¿Qué genes están relacionados con la enfermedad?
El gen CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) codifica el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística, que es una proteína cuya principal función está relacionada con el transporte de iones de cloro a través de la membrana celular.
Este gen se encuentra en el brazo largo del cromosoma 7 (7q31.2) e incluye 27 exones xon un tabaño de 250 kb que dan lugar a un RNA mensajero de 6.500bp. Este gen origina una proteína llamada CFTR, de 1.480 aminoácidos y un peso molecular de 168 kDa. CFTR está regulado por AMPc, que a la vez regula muchos otros canales iónicos. La disfunción de este canal afecta a múltiples órganos, especialmente a las vías respiratorias superiores e inferiores.
N Eng J Med 2015; 373: 220-231
A día de hoy se han descrito más de 1.400 mutaciones diferentes en este gen. La mayoría de mutaciones provocan cambios de aminoácidos individuales en la proteína CFTR o bien provocan la eliminación de una pequeña porción de la secuencia de aminoácidos. La mutación más frecuente provoca la eliminación de 3 pares de bases en el exón 10 del gen y ello provoca la pérdida de una fenilalanina en la posición 508 de la proteína. Este cambio afecta a la estabilidad y conformación tridimensional de la proteína y por lo tanto, el canal iónico no llega nunca a formarse.
Esta enfermedad se hereda con un patrón autosómico recesivo, es decir, ambas copias del gen en cada célula deben tener la mutación para que se produzca la enfermedad. Los padres de un individuo con una enfermedad autosómica recesiva tienen una copia del gen mutado, pero por lo general no muestran signos y sintomas de la enfermedad.
Diagnóstico de la Fibrosis quística mediante Agena Bioscience
Actualmente, la American College of Medical Genetics (ACMG) y la American Congress of Obstetricians and Gynecologists (ACOG) recomiendan el análisis rutinario de las mutaciones más prevalentes del gen CFTR a todas las parejas que quieren quedarse embarazadas. Diferentes estudios realizados en Estados Unidos y Europa, indican que >86% de los portadores de Fibrosis quística, son portadores de la mutación F508del. Sin embargo, mutaciones adicionales deben ser analizadas para aumentar la cobertura. Este hecho es especialmente importante para ciertos grupos étnicos. Hasta la fecha, diferentes laboratorios has testado más de 100,000 muestras para el gen de CFTR utilizando el equipo MassARRAY. Agena Bioscience™ ofrece un panel customizado en base a un muy bien caracterizado CFTR HapMap de Coriell Biorepository (MUTCF-2).
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MassARRAY: una plataforma versátil
El sistema MassARRAY® es una plataforma flexible is a flexible que permite analizar una amplia variedad de análisis genéticos. De tal forma que en el mismo ensayo podemos analizar muestras para diagnóstico oncológico, farmacogenética o bien un ensayo customizado para el diagnóstico de una enfermedad genética hereditaria como es la fibrosis quística. Utilizando oligonucleótidos no marcados, generar ensayos customizados es rápido, sencillo y rentable.
Agena Bioscience proporciona dos opciones diferentes para los usuarios interesados en crear ensayos a la carta de genotipación, detección de mutaciones somáticas o ensayos epigenéticos. Por un lado, el usuario puede desarrollar su propio panel utilizando el software online Assay Design software o bien, puede ser asesorado por el equipo científico que Agena Bioscience pone a su disposición.
El sistema MassARRAY al ser una plataforma abierta, permite ser flexible en cuanto al número de muestras que se pueden procesar y al número de ensayos. Gracias a la gran capacidad de multiplexar, el sistema permite analizar decenas hasta cientos de genotipos y/o mutaciones somáticas con muy poco material de partida. Los SpectroCHIP® están disponibles en formato de 96 y 384 pocillos. De tal forma, que a pleno rendimiento, un instrumento puede procesar hasta diez chips en el mismo día.
¡Descubre toda la variedad de ensayos incluidos en Assays by Agena!
En general, cada muestra está sujeta a una PCR multiplex utilizando 10 ng de DNA genómico y seguido de la extensión de un único nucleótido gracias a los reactivos iPLEX® Pro. Los productos extendidos se dispensan al SpectroCHIP® Array y son detectados mediante espectrometría de masas utilizando el equipo MassARRAY. Una vez finalizado el proceso, un software automatizado emite un informe con el número de llamadas producidas para cada mutación analizada y su respectivo valor de confianza.
¿Tienes dudas?
Si no te queda claro del todo cómo funciona esta tecnología, o quieres que te ayudemos a configurar tu ensayo, nuestro departamento técnico de especialistas, con amplia trayectoria en investigación (todos PhD), te pueden echar una mano: por mail (tecnic@labclinics.com), por tlf +34.934464700 o de forma presencial. Contáctanos y estaremos encantados de poder ayudarte!
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