Los ensayos de Quantigene™ constituyen una herramienta versátil que permite realizar un enfoque integral. Esta tecnología permite realizar una cuantificación precisa y exacta del ARN, miARN y el ADN directamente de la muestra. Estos ensayos basados en hibridación directa evitan los sesgos asociados a la purificación de los ácidos nucleicos, síntesis de cDNA o la propia PCR. Sigue leyendo para descubrir más detalles.
- ¿Sigue siendo la qPCR la técnica de referencia para medir la expresión génica?
- Quantigene Plex Assay: análisis de la expresión génica
- Quantigene Plex Assay: Principales Pasos
- Paneles prediseñados de Quantigene
¿Sigue siendo la qPCR la técnica de referencia para medir la expresión génica?
A día de hoy, la PCR cuantitativa (qPCR) es ampliamente considerada la técnica de referencia para determinar y cuantificar la expresión del RNA pero ésta presenta algunas limitaciones. Los investigadores de centros privados y públicos están constantemente probando nuevas tecnologías que permitan obtener resultados de forma masiva.
¿Si consideras que estás…
- … gastando mucho tiempo purificando tus muestras de RNA?
- … frustrado diseñando primers y optimizando muchas PCRs?
- … deseando obtener un bajo %CVs o una mejor sensibilidad?
- … experimentando variabilidad en la eficiencia de tus primers o en la producción de cDNA?
Imagina lo que podrías conseguir si…
- … la purificación del ARN no fuera necesaria, ahorrándote mucho tiempo.
- … la transcripción reversa no fuera un requisito, eliminando variabilidad.
- … pudieses diseñar tu propio panel customizado en dos semanas para identificar tus genes de interés.
- … analizaras hasta 80 marcadores en un único análisis, reduciendo de forma drástica el número de experimentos.
Quantigene Plex Assay: análisis de la expresión génica
Los análisis de Quantigene® Plex proporcionan la manera más rápida y eficiente de realizar un cribado de alto rendimiento (high throughput) para realizar estudios de expresión génica cuantitativa y multiplexada. Los paneles a la carta son diseñados, testados y enviados en un periodo de 2 semanas desde la petición del cliente. Recuerda, no es necesario purificar el ARN de tus muestras, tan solo obtén un lisado y pon en marcha el ensayo Quantigene.
Los ensayos Quantigene® Plex son análisis basados en hibridación y utilizan como tecnología de amplificación del señal DNA ramificado (branched DNA) gracias a los equipos Luminex xMAP® beads. El RNA diana se cuantifica directamente sin necesidad de producir cDNA o PCR.
Evita la purificación de RNA. Los análisis de Quantigene Plex cuantifican directamente a partir de lisados celulares u homogenados de tejido, ahorrándote tiempo y minimizando problemas causados con la contaminación o manipulación del ARN.
¡Reduce 20 placas de qPCR a tan solo una placa de Quantigene Plex!Beneficiándose de la alta capacidad de multiplexado que ofrece la tecnología Luminex xMAP®, los ensayos de Quantigene Plex permiten analizar hasta 80 genes de interés en un único pocillo sin contaminación cruzada. Todo ello permite aumentar la eficiencia y reducir la carga de trabajo en el laboratorio. Además, en el mismo ensayo podemos añadir diferentes genes de referencia para normalizar los resultados obtenidos.
Cuantifica con seguridad. Emita los errores típicos de la PCR cuantitativa debidos a variaciones en la eficiencia de los primers, transcripción reversa o problemas con la amplificación del ADN. Además, la lectura lineal que realizan los ensayos Quantigene Plex permiten obtener una simple y significativa interpretación de los datos.
Aplicaciones. Drug discovery (cribado de compuestos, ADME/Tox screening), validación de microarrays, estudios de biomarcador utilizando muestras de archivo o muestras de sangre, determinación de longitud de telómeros, testaje de la eficiencia de silenciación mediante RNAi, análisis de vías de señalización, análisis de CNV u optimización de protocolos de diferenciación de iPSC.
Quantigene Plex Assay: Principales Pasos
Los ensayos Quantigene Plex se realizan en placas de 96 pocillos. La tecnología se basa en la cuantificación DIRECTA de RNA y permite multiplexar entre 3 y 80 genes de interés en un único pocillo.
Paso 1. Preparación de la muestra. Las muestras se lisan para liberar y estabilizar el ARN. Este análisis funciona con una amplia variedad de tipos de muestra: cultivo celular, tejido de origen humano, animal o vegetal, muestras parafinadas, sangre total y/o PAXGene o bien con RNA purificado.
Paso 2. Hibridación. Se realiza una hibridación overnight en la placa de 96-pocillos utilizando las sondas especificas del panel: Capture Extenders [CE], label extenders [LE] y Blocking Probes [BP].
Paso 3. Amplificación del señal. El señal se amplifica utilizando la tecnología del ADN ramificado. Una molécula pre-amplificadora (PreAmp) se hibrida a cada par de Label Extenders. De esta forma, las moléculas multiple Amplifier (Amp) hibridan a cada PreAmp. Finalmente, cada sonda de oligonucleótidos hibrida a cada Amp. Si tienes alguna duda, echa un vistazo al diagrama que tienes arriba.
Paso 4. Detección. La adición de Estreptavidina – Ficoeritrina (SAPE) genera un señal que es proporcional a la cantidad de ARN diana que tenemos en la muestra. El señal se debe leer utilizando un equipo Luminex.
Deja tu respuesta