Los dyes super Bright de eBioscience son una línea de fluoróforos brillantes basados en un polímero y sus tándems que son excitados por el láser violeta (405 nm). Para no liarte con la nomenclatura, todos los formatos Super Bright se nombran por su longitud de onda de emisión.
- ¿Son compatibles con otros reactivos?
- SUPER BRIGHT 436
- SUPER BRIGHT 600
- SUPER BRIGHT 645
- SUPER BRIGHT 702
- SUPER BRIGHT STAINING BUFFER
Estos dyes han sido optimizados para su uso en citometría de flujo y así poder discriminar poblaciones poco brillantes.
¿Son compatibles con otros reactivos?
La respuesta es sí. Los dyes Super Bright son compatibles con otras moléculas fluorescentes de uso común, con los reactivos y búferes de fijación eBioscience, así como las microesferas UltraComp Beads.
Gracias a estas características, el amplio portfolio de productos eBioscience se puede combinar para poder diseñar paneles multicolor de anticuerpos de citometría de flujo y poder sacarle el máximo partido al láser violeta.
Son dyes robustos, de alta sensibilidad y estables que encajan en cualquier panel de citometría de flujo.
A continuación os presentamos un pequeño resumen de los nuevos productos:
SUPER BRIGHT 436
El Super Bright 436 tiene un pico de excitación máximo de 414 nm y un pico de emisión de 436 nm. Se recomienda utilizar un filtro de 450/50, similar al eFluor 450. Este polímero dye es significativamente más brillante que el eFluor 450 y es una alternativa al Brilliant Violet 421 con una resolución similar en poblaciones positivas y negativas (figura). Los estudios de estabilidad indican que el Super Bright 436 tiene una pérdida mínima de fluorescencia al exponer las células teñidas a fijación por formaldehido hasta 3 días, o una exposición sin tapar las células de la luz ambiente durante una noche.
Fluorescence intensity comparison.
(A) Human peripheral blood cells were stained with Anti-CD19 (clone HIB19) conjugated to either Super Bright 436 (purple histogram), eFluor 450 (blue histogram), or Brilliant Violet 421 (orange histogram) using the manufacturer’s recommended volume per test. (B) Anti-human peripheral blood cells were stained with Anti-CD27 (clone O323) conjugated to either Super Bright 436 (purple histogram) or Brilliant Violet 421 (blue histogram)
SUPER BRIGHT 600
Super Bright 600 es dye tándem que consiste en el Super Bright 436 y un dye aceptor que emite a 600 nm. Se puede detectar utilizando un filtro de 610/20 o equivalente, similar al eVolve 605. En cuanto a brillo, este tándem polímero se puede comparar al Brilliant Violet 605 (figura y es más brillante que el eVover 605. Super Bright 600 es estable hasta 3 días tras fijarse con una solución de formaldehido.
Staining performance and post-fixation stability.
(A) Direct comparison of mouse splenocytes stained with Anti-CD8a (clone 53-6.7) conjugated to either Super Bright 600 (red histogram) or Brilliant Violet 605 (gray histogram), at the same concentration of antibody.
(B) Mouse splenocytes were stained with Anti-CD45 (clone RA3-6B2) Super Bright 600 and either left unfixed (red histogram), or were fixed in IC Fixation buffer for 30 minutes (blue histogram), 24 hours (orange histogram), or three days (green histogram)
SUPER BRIGHT 645
Invitrogen eBioscience Super Bright 645 dye es un dye polímero tándem que consiste en el laser excitable Super Bright 405 y un dye aceptor que emite a 645 nm. La tecnología Super Bright resulta útil para identificar marcadores de baja abundancia en la superficie celular en citometría gracias a su alta eficacia de emisión.
Fluorescence intensity comparison with Super Bright 645 dye (A) Mouse splenocytes stained with CD8a antibody (clone 53-6.7) conjugated to Super Bright 645 dye (red histogram) or Brilliant Violet 650 dye (gray histogram), at the same concentration of antibody. (B) Human peripheral blood cells stained with CD8a antibody (clone RPA-T8) conjugated to Super Bright 645 dye (red histogram) or Brilliant Violet 650 dye (gray histogram), using the same concentration of antibody.
SUPER BRIGHT 702
Invitrogen eBioscience Super Bright 702 dye es un dye polímero tándem que consiste en el laser excitable Super Bright 405 y un dye aceptor que emite a 702 nm.
Son una alternative a los conjugados Brilliant Violet 711, y oresentan una major resolución de poblaciones positivas y negativas, con menos fondo y menos interacción entre dyes que los conjugados Brilliant Violet 711.
Fluorescence intensity comparison with Super Bright 702 dye (A) Mouse splenocytes stained with CD4 antibody (clone GK1.5) conjugated to Super Bright 702 dye (red histogram) or Brilliant Violet 711 dye (gray histogram), at the same concentration of antibody. (B) Human peripheral blood cells stained with CD19 antibody (clone HIB19) conjugated to Super Bright 702 dye (red histogram) or Brilliant Violet 711 dye (gray histogram), using the same concentration of antibody
SUPER BRIGHT STAINING BUFFER
Los dyes Super Bright se pueden utilizar en citometría de una manera equivalente a los fluoróforos tradicionales. Sin embargo, si se combinan varios anticuerpos conjugados Super Bright en el mismo panel, se recomienda utilizar el Super Bright Staining Buffer para minimizar las interacciones no específicas que puedan darse entre los dyes basados en polímeros.
Super Bright Staining Buffer minimizes non-specific interactions
Human peripheral blood cells were stained with Anti-CD8 (clone RPA-T8) Super Bright 600 and Anti-CD4 (clone SK3) conjugated to Super Bright 436 (A and B) or Brilliant Violet 421 (C and D). Cells were stained in the presence of Flow Staining Buffer only (A and C) or Super Bright Staining Buffer was added to cells prior to addition of antibodies (B and D)
Si solo se utiliza un anticuerpo Super Bright en un panel grande no es necesario ningún buffer especial.
Cuando se combinan los dyes Super Bright con otros dyes de polímeros como puede ser el Brillian Violet, se puede utilizar el Super Bright Staining Buffer para prevenir las interacciones entre dyes. Super Bright Staining Buffer está formulado a 5 ul/test para que sea fácil de utilizar al preparar coctails.
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