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Péptidos, librerias y microarrays
Hay numerosas aplicaciones donde la utilización de péptidos presenta claras ventajas respecto a las proteínas. Los péptidos, al ser una estructura más simple, son más fáciles de definir y sintetizar con rapidez y coherencia comparado con una proteína.
La gran flexibilidad y los métodos bien establecidos para la síntesis de péptidos permiten la producción de péptidos personalizados cuidadosamente diseñados que pueden utilizarse, entre muchas aplicaciones, para:
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- Determinar la especificidad de un anticuerpo en ensayos de unión competitiva
- Estudios de epítopos en el cribado de proteínas
- Estudios de interacción
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Síntesis de péptidos
Síntesis de péptidos de hasta 100 residuos mediante Solid-phase peptide synthesis (SPPS) empleando la química Fmoc, desde el C-terminal hasta el N-terminal de la secuencia.
- Crude (<70%), destinada a estudios preliminares o aplicaciones en las que una pureza elevada no es crítica.
- Standard ( 80%-95%) adecuada para aplicaciones como ensayos in vitro, estudios de bloqueo de péptidos.
- Higher purity (>95%) , normalmente necesaria para estudios de RMN, cristalografía de rayos X, estudios enzimáticos y estructurales.
El contenido neto de péptidos suele oscilar entre el 50 y el 80% del peso bruto. Es diferente de la pureza, que mide específicamente el porcentaje de la secuencia peptídica objetivo dentro del componente peptídico de su muestra.
Por lo general, los péptidos son estables a temperatura ambiente durante varias semanas. Para su almacenamiento a largo plazo, es mejor conservarlos en un lugar seco y oscuro a -20°C. Una vez reconstituidos, los péptidos deben utilizarse en pocos días. La estabilidad puede disminuir si los péptidos se conservan en solución o a temperatura ambiente. Proteja los péptidos de la luz y la humedad para maximizar su estabilidad.
- Purificación por HPLC, acorde con requerimientos de la aplicación final.
- Envío a temperatura ambiente, como sólido liofilizado. De requerir otro formato, especificar.
Librería de péptidos
- Mezclas de péptidos: un solo péptido con pequeñas sustituciones en su secuencia. Por ejemplo, la secuencia peptídica LEYASXFE donde X se sustituye por varios aminoácidos, por ejemplo Ser, phosSer, Gly.
- Gran cantidad de péptidos individuales: librerías de 48 a 576 péptidos producidos en un lote de síntesis, liofilizados y listos para su uso.
- Se suministran en formato de bandeja de microtitulación de 8 x 12, bandejas de microtitulación de pocillos profundos o tubos de 1,2 ml numerados individualmente.
- Acetilación N-terminal, biotinilación, colorantes, etc.
- Se pueden incorporar aminoácidos inusuales
- Rendimientos estimados de 0,5 – 2 mg de cada péptido
Microarrays
Los péptidos se imprimen en portaobjetos de vidrio recubiertos con sustratos específicos directamente desde las bandejas de microtitulación justo después de su síntesis. Esto permite una producción eficaz y precisa de grandes cantidades de péptidos inmovilizados en portaobjetos para una amplia gama de aplicaciones, como las interacciones proteína-proteína, el cribado de anticuerpos y los estudios antígeno-anticuerpo.
- Hasta 192 péptidos diferentes por portaobjetos, cada péptido impreso por duplicado
- Copia directa de la disposición de 96 pocillos en el portaobjetos
- La unión altamente específica permite una orientación precisa del péptido en la superficie
- El uso de un espaciador entre el péptido y la molécula aglutinante garantiza una alta disponibilidad del péptido
- La mayoría de las modificaciones comunes de péptidos pueden utilizarse en el conjunto de microarrays
- Los portaobjetos son compatibles con la mayoría de los sistemas de obtención de imágenes
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