AdipoGen Life Sciences (AdipoGen) desarrolla proteínas, anticuerpos y kits de ELISA. Para promover el avance de la investigación sin el empleo de animales (Principio de las 3R), AdipoGen ha implementado una linea de producto enfocada al desarrollo de anticuerpos monoclonales sin el uso de animales.
Usando esta tecnología, AdipoGen fue uno de los pioneros en la lanzamiento de anticuerpos monoclonales para investigación en el mercado en 2010: anti-APRIL (ratón), mAb (rec.) (Bloqueo) (Apry-1-1). Desde entonces, el catálogo de AdipoGen ha ido creciendo en el número de anticuerpos monoclonales de forma continua.
La presentación de anticuerpos en fagos es una tecnología in vitro para generar anticuerpos monoclonales recombinantes (RecMAbs™) sin el uso de animales. Constituye una alternativa a la tecnología tradicional de generar hibridomas y que evita las limitaciones relacionadas con el sistema inmune. Esta tecnología utiliza bibliotecas de genes de anticuerpos humanos que no presentan un tratamiento previo. Estas bibliotecas están formadas por miles de millones de scFv (fragmento de cadena única variables) compuesto por un VH (dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina humana) y un VL (dominio variable de la cadena ligera de inmunoglobulina humana) conectados por un conector de polipéptido. Los fragmentos de anticuerpos se fusionan con la proteína de recubrimiento pIII y se muestran en la superficie de los bacteriófagos filamentosos (M13). Los scFv se seleccionan in vitro por selección de afinidad con el antígeno en un proceso denominado selección, donde el antígeno de interés queda recubierto en un vial (ver Figura). Los métodos de cribado se basan en cuatro pasos principales: i) preparación de bibliotecas que presentan los fagos; ii) adsorción del fago de unión específico en un vial recubierto con antígeno, iii) eliminación de los fagos inespecíficos o de baja afinidad, y iv) recuperación de los aglutinantes diana que se reactivarán después de la infección bacteriana para la siguiente ronda de selección. Se realizan múltiples rondas de cribado para enriquecer los fagos scFv específicos de antígeno. Los anticuerpos monoclonales son identificados posteriormente mediante cribado después de la última ronda de selección. Finalmente, el scFv monoclonal seleccionado se clona en un vector apropiado que contiene una porción de Fc de interés y posteriormente se produce en células de mamífero para generar una proteína de fusión de scFv-Fc similar a IgG.
Existen muchas ventajas para usar anticuerpos recombinantes en lugar de anticuerpos «clásicos». Estas ventajas son las siguientes: i) no es necesario sacrificar animales en una instalación de animales; ii) producción económica y almacenamiento permanente de clones de ADN; iii) anticuerpos definidos por la secuencia y que permiten la reproducibilidad en experimentos; iv) uso de fragmentos de anticuerpo de cadena sencilla para dar formato a un nuevo RecMAb ™ para investigación o bien para fines terapéuticos.
Un atributo importante de los RecMAbs™ es la capacidad de diseñar estrategias de selección para generar anticuerpos con funciones personalizadas (FuncAbs™), que además se pueden clasificar según la actividad o el modo de unión. Por ejemplo, es posible generar RecMAbs™ que: (i) reconocen preferentemente un estado conformacional y, por lo tanto, tienen el potencial de inducir un cambio conformacional; (ii) regiones específicas de la superficie de la proteína objetivo («específicas de región») o (iii) reconocen específicamente complejos de múltiples proteínas.
Características de los anticuerpos RecMAbs ™
- Desarrollados a partir de una biblioteca de fagos de anticuerpos humanos.
- Consisten en un scFv (variable de fragmento de cadena única) que se compone de VH (dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina humana) y VL (dominio variable de la cadena ligera de inmunoglobulina humana) fusionado a una región Fc.
- Producido en células de mamíferos (CHO o HEK293).
- Propiedades similares a los anticuerpos monoclonales desarrollados en ratón/rata.
- Permiten el uso de anticuerpos secundarios estándar.
- Ideales sobre antígenos conservados (poco inmunogénicos en animales).
- Permiten detectar epítopos conformacionales (por ejemplo, proteínas unidas a GTP).
- Permiten detectar modificaciones post-transcripcionales de proteínas (por ejemplo, fosforilaciones, ubiquitinaciones).
- Permiten intercambiar la región Fc con Fc de otras especies.
Listado de Anticuerpos Monoclonales [RecMAbs™] desarrollados sin el uso de Animales
Nombre | Referencia | Isotipo | Aplicaciones | Especies |
anti-Angiopoietin-2, mAb (rec.) (blocking) (Angy-2-1) | AG-27B-0016 | Mouse IgG2bλ | ELISA, FUNC, ICC | Human, Mouse |
anti-Angiopoietin-2 (human), mAb (rec.) (blocking) (Angy-1-4) | AG-27B-0015 | Human IgG2λ | ELISA, FUNC | Human |
anti-APRIL (mouse), mAb (rec.) (blocking) (Apry-1-1) | AG-27B-0001 | Mouse IgG2bλ | ELISA, IP, FUNC | Mouse |
anti-APRIL (mouse), mAb (rec.) (blocking) (Apry-1-3) | AG-27B-0017 | Human IgG1λ | ELISA, IP, FUNC | Mouse |
anti-EGFP, mAB (rec.) (G3) | AG-27B-0007 | Human IgG2λ | ELISA, ICC, IP | – |
anti-Giantin, mAb (rec.) (TA10) | AG-27B-0003 | Human IgG2λ | ICC | Human, Mouse |
anti-HMGB1, mAb (rec.) (Giby-1-4) | AG-27B-0002 | Human IgG2λ | ELISA, WB | Human, Mouse, Rat |
anti-IL-1R2 (mouse), mAb (rec.) (Praxy-1-1) |
AG-27B-0011 | Mouse IgG2bλ | ELISA, FACS | Mouse |
anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.) (blocking) (Bondy-1-1) |
AG-27B-0013 | Mouse IgG2b | ELISA, FUNC | Mouse |
anti-IL-33 (mouse), mAb (rec.) (Carly-1-4) |
AG-27B-0012 | Human IgG2λ | ELISA, WB | Mouse |
anti-LRP5/6, mAb (rec.) (Heldy-1-4) |
AG-27B-0019 | Human IgG2λ | FACS | Human, Mouse |
anti-Myosin IIA (non-muscle) (heavy chain), mAb (rec.) (SF9) |
AG-27B-0010 | Human IgG2λ | EM, ELISA, ICC, IP | Drosophila, Human, Mouse, Rat |
anti-Netrin-1 (human), mAb (rec.) (blocking) (2F5) (preservative-free) |
AG-27B-0018PF | Mouse IgG2λ | ELISA, FUNC | Human, Mouse |
anti-Netrin-1 (human), mAb (rec.) (H4) (preservative-free) |
AG-27B-0020PF | Mouse IgG2λ | ELISA, FUNC (Negative Control) | Human, Mouse |
anti-PEDF (human), mAb (rec.) (Serpy-1-4) |
AG-27B-0014 | Human IgG2λ | ELISA, WB | Human |
anti-PSD-95 (palmitoylated), mAb (rec.) (PF11) |
AG-27B-0021 | Human IgG2 | ICC, IHC | Human, Mouse, Rat |
anti-Rab1-GTP, mAb (rec.) (ROF7) |
AG-27B-0006 | Human IgG2λ | ICC, IP | Dog, Human, Mouse, Rat |
anti-Rab6-GTP, mAb (rec.) (AA2) |
AG-27B-0004 | Human IgG2λ | ICC | Drosophila, Human, Mouse |
anti-α-Tubulin, mAb (rec.) (F2C) |
AG-27B-0005 | Human IgG2λ | ICC, WB | Bovine, Human, Mouse |
anti-β-Tubulin, mAb (rec.) (S11B) |
AG-27B-0008 | Human IgG2λ | ELISA, ICC, IP | Drosophila, Human, Monkey, Mouse, Pig, Rat |
anti-Tubulin-GTP, mAb (rec.) (MB11) |
AG-27B-0009 | Human IgG2λ | ICC | Drosophila, Human, Mouse, Rat |
Anticuerpos monoclonales recombinantes: producidos sin uso de animales
• Desarrollado a partir de una biblioteca de visualización de fagos de anticuerpos humanos.
• Producido en células de mamíferos (CHO o HEK 293).
• Ideal para antígenos conservados (que son poco inmunogénicos en animales).
• Para fines de investigación o aplicaciones terapéuticas.
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